• Publié par : Alain Fautrel
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Microdissection laser (LCM)

 

 

 

 

Le VERITAS (Arcturus) permet la capture spécifique de groupes de cellules à partir de coupes de tissus congelées ou inclus en paraffine et également la capture de cellules en culture.


Le système utilise un laser Infra rouge (IR) de basse énergie permettant d'activer un film thermo-sensible se trouvant au dessus des cellules ou du tissu d'intérêt.

Cet appareil possède également un laser UV permettant la dissection rapide de larges zones de tissus.

 

Des capsules spécialement développées sont coatées avec ce film. Une fois positionné au dessus des zones d'intérêts, l'appareil dirige le laser IR à travers la capsule pour coller le film sur les cellules d'intérêts. Lorsque la capsule est soulevée les cellules fixées au film thermosensible sont arrachées spécifiquement du tissu. La capsule peut être placée directement dans un microtube contenant la solution de lyse pour en extraire l'ADN, l'ARN ou les protéines.


A titre d'exemple : Nos premiers travaux nous ont permis de récupérer 100ng d'ARN à partir d'un prélèvement d'1mm2 d'une coupe de tissu congelé de 10µm.

La capture est effectuée sur coupes de tissus de quelques microns, provenant de tissus congelés coupés au cryostat ou de tissus inclus en paraffine coupés au microtome. Les coupes sont déposées sur lames de verre ou sur films plastiques. La reconnaissance des cellules d'intérêt est obtenue par coloration ou par immuno-histochimie. Des étapes de déshydratation permettent d'une part la protection des ARNs en bloquant l'action des RNAses mais également l'adhérence des cellules ciblées.

 

 

Equipement financé avec le soutien de l'Association de recherche contre le Cancer (ARC)et la Ligue contre le cancer